HiCynth™改良煌綠瓊脂基礎培養基,經改良后用于選擇性分離傷寒沙門氏菌之外的沙門氏菌,樣本是糞便、食物和奶制品。
組成:
成分 g/L
HiCynth™蛋白胨5號 3.000
HiCynth™蛋白胨4號 10.000
乳糖 10.000
蔗糖 10.000
氯化鈉 5.000
酚紅 0.080
煌綠 0.0125
瓊脂 20.000
zui終pH值(25℃) 6.9±0.2
使用指導:
在1000ml蒸餾水中重懸29.05g培養基干粉。必要時加熱以*溶解。高壓滅菌(15磅121℃,15分鐘)。避免過熱。涼至45-50℃。要提高選擇性,可無菌加入1管水化的磺胺類添加劑(#FD068),混勻后倒入無菌平板。
原理和說明:
沙門氏菌引起多種類型的感染,從輕微的自限性胃腸炎到危及生命的傷寒。zui常見的沙門氏菌病是自限性胃腸炎,發熱持續不到2天,腹瀉持續不到7天。
HiCynth™改良煌綠瓊脂基礎培養基為分離沙門氏菌的主要培養基,是由Kristensen等人描述1。考夫曼進一步改進2。美國公共衛生學會3和FDA4,5也推薦使用煌綠瓊脂,歐洲藥典、英國藥典和印度藥典也描述了這一方法6,7,8。
該培養基含有煌綠,能抑制大多數革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌的生長。傷寒沙門氏菌、志賀菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌被廣泛抑制。臨床標本可直接接種在該培養基上。但是,由于高度選擇性,推薦該培養基與其他較少抑制作用的培養基一起使用,以增加恢復率的機會。
該培養基包含有HiCynth™蛋白胨4號和HiCynth™蛋白胨5號提供必要的氮源和碳源的化合物、長鏈氨基酸、維生素,還有其他必需的營養成分。乳糖和葡萄糖是能量來源,它們在培養基中發酵形成酸性pH值,可被酚紅指示劑檢測到。氯化鈉維持培養基的滲透壓平衡。煌綠抑制可能帶來污染的微生物菌落。當樣本懷疑有大量的競爭菌時,可向該培養基添加磺胺醋酰(1g/L)和扁桃酸鈉(0.25g/L)。
非乳糖發酵菌在培養18-24小時后形成白色至粉紅色菌落。傷寒沙門氏菌和志賀菌不會在這種培養基上生長。此外,變形桿菌、綠膿桿菌、枸櫞酸桿菌屬可能會模仿腸道菌產生紅色的小菌落。
質量控制
外觀
淡黃色至淡粉色均一松散粉末
成膠性
結實,相當于2.0%瓊脂糖凝膠
制備好的培養基顏色和透明度
在平皿中為透明棕綠色至輕微乳白色凝膠
pH值(25℃)
6.70-7.10
培養反應
30-35℃培養24-48小時。恢復率以細菌在大豆酪蛋白水解瓊脂上生長為100%
微生物 | 接種量(CFU) | 生長狀況 | 批次值(CFU) | 恢復率 | 菌落顏色 |
傷寒沙門氏菌ATCC 14028 | 50-100 | 生長旺盛 | 25-100 | ≥50% | 粉白色 |
阿博尼沙門氏菌NCTC 6017 | 50-100 | 生長旺盛 | 25-100 | ≥50% | 粉白色 |
腸炎沙門氏菌ATCC13076 | 50-100 | 生長旺盛 | 25-100 | ≥50% | 粉白色 |
傷寒沙門氏菌ATCC 6539 | 50-100 | 生長良好 | 15-40 | 30-40% | 紅粉色 |
大腸桿菌ATCC 25922 | 50-100 | 基本不生長 | 0-10 | 0-10% | 黃綠色 |
大腸桿菌ATCC 8739 | 50-100 | 基本不生長 | 0-10 | 0-10% | 黃綠色 |
大腸桿菌 NCTC 9002 | 50-100 | 基本不生長 | 0-10 | 0-10% | 黃綠色 |
金黃葡萄球菌ATCC 25923 | ≥10³ | 抑制 | 0 | 0% | |
金黃葡萄球菌ATCC 6538 | ≥10³ | 抑制 | 0 | 0% |
儲存和保質期
30℃以下密閉保存。配好后的培養基2-8℃保存。在標簽上的截止日期前使用。
參考文獻:
1. Kristensen M., Lester V, and Jurgens A., 1925,Brit.J.Exp.Pathol.,6:291.
2. Kauffman F., 1935, Seit F. Hyg. 177:26.
3. Downes F. P. and Ito K. (Ed), 2001, Compendiumof Methods for Microbiological Examination of Foods, 4th Ed. APHA,WashingtonD.C.
4. Standard Methods for the MicrobiologicalExamination of Dairy Products, 1995, 19th Ed, APHA, Washington, D.C.
5. Bacteriological Analytical Manual, 5th Ed,1978, AOAC, Washington D.C.
6. The European Pharmacopoeia, 2014, Council orEurope, Strasbourg.
7. The British Pharmacopoeia, 2016 vol. II,London.
8. Indian Pharmacopoeia, 2014, Ministry of Healthand Family Welfare, Govt., of India.